亮發(fā)光桿菌使用 HPLC 檢測(cè)各菌株發(fā)酵產(chǎn)物次生代謝產(chǎn)物的差異情況，分析流動(dòng)相為：乙腈-水(2‰的乙酸)，流速：0.6 mL/min，均采用全波長(zhǎng)掃描。HPLC 洗脫條件： 0–40 min ： 10%–50% 乙腈梯度， 40–50 min：50%–75%乙腈梯度，50–60 min： 75%–100%乙腈梯度，60–68 min：純乙腈洗脫， 70–90 min：10%乙腈平衡柱子。色譜柱為：分析柱為 Agilent 5 TC-C18(2) 250 mm×4.6 mm，SN： 588925-902，PN：509550。進(jìn)樣體積為 10 μL。

利用 10 g的60–100目層析硅膠將制備好的粗提物進(jìn)行拌樣。然后，使用 60 g 的 200–300 目層析硅膠進(jìn)行干法裝柱，層析柱的規(guī)格為：4 cm×60 cm。待上樣完成后，使用醇為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫。首先使用500 mL 進(jìn)行洗脫，再逐漸增加洗脫劑中甲醇的比例，當(dāng)洗脫劑中: 甲醇的比例為20∶1 時(shí)(洗脫體積為 1.5 L)，利用 HPLC 檢測(cè)該組分，發(fā)現(xiàn)了一個(gè)化合物與?PKS-3 發(fā)酵樣品中所缺少的化合物的保留時(shí)間和特征吸收波長(zhǎng)均一致，該份樣品命名為SF1。當(dāng)洗脫劑:甲醇的比例為 10∶1 時(shí)(洗脫體積為 1.2 L)，將洗脫下來的組分利用HPLC 檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)含有 ?PKS-9 中缺少的化合物，該份樣品命名為SF2。

接下來，亮發(fā)光桿菌將含有目標(biāo)化合物的兩份樣品，分別使用 Sephadex LH-20 進(jìn)行凝膠過濾色譜純化 (色譜柱規(guī)格為 1.8 cm×160 cm)，洗脫劑為甲醇，流速為 6–8 d/min，然后，分別將含有目標(biāo)化合物的樣品進(jìn)行減壓干燥后，繼續(xù)分離純化。其中，SF1 組分利用正相硅膠柱層析(色譜柱規(guī)格為 1.5 cm×50 cm)，裝柱硅膠為 18.5 g，洗脫劑為石油醚：丙酮=85：15，分別收集洗脫組分，將含有較純化合物的組分進(jìn)行減壓干燥，zui終得到化合物 SF1 的純品約 100 mg。SF2 組分再利用正相硅膠柱層析(色譜柱規(guī)格為 1.5 cm×50 cm)，裝柱硅膠為 15.0 g，利用：甲醇=10：1 進(jìn)行洗脫，將含有較純的目標(biāo)化合物組分進(jìn)行減壓干燥，zui終得到化合物 SF2 的純品為 20 mg。
Ciclopirox Related Compound A    25mg    環(huán)吡酮相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品        
Ciclopirox Related Compound B    25mg    環(huán)吡酮相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品    14818-35-0    
Cilastatin Ammonium Salt    100mg    西司他丁銨標(biāo)準(zhǔn)品        
Cilostazol    200mg    西洛他唑標(biāo)準(zhǔn)品    73963-72-1    
Cimetidine    200mg    西咪替丁標(biāo)準(zhǔn)品    51481-61-9    
Cimetidine Hydrochloride    200mg    鹽酸西咪替丁標(biāo)準(zhǔn)品    70059-30-2    
Cinoxacin    200mg    西諾沙星標(biāo)準(zhǔn)品    28657-80-9    
Ciprofloxacin    200mg    環(huán)丙沙星標(biāo)準(zhǔn)品    85721-33-1    
Ciprofloxacin Formamide    125mg    環(huán)丙沙星甲酰胺標(biāo)準(zhǔn)品    93594-39-9    
Ciprofloxacin Hydrochloride    400mg    鹽酸環(huán)丙沙星標(biāo)準(zhǔn)品    86393-32-0  
亮發(fā)光桿菌