商品屬性：

背景：

末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶，也稱為末端轉(zhuǎn)移酶，是在未成熟的，B淋巴樣細(xì)胞前提，T淋巴細(xì)胞前體和急性淋巴細(xì)胞白血病/淋巴瘤細(xì)胞中表達(dá)的一種特殊的DNA聚合酶。 通常，TdT催化將核苷酸添加到DNA分子的3'末端。 與大多數(shù)DNA聚合酶不同，它不需要模板。 該酶的優(yōu)選底物是3'突出端，但它也可以將核苷酸添加到平末端或凹入的3'末端。

標(biāo)記：

1.將細(xì)胞培養(yǎng)基與EdU溶液按照500：1的比例混合，制成2×EdU標(biāo)記培養(yǎng)基。

2.提前將2×EdU標(biāo)記培養(yǎng)基預(yù)熱，然后將150微升2×EdU標(biāo)記培養(yǎng)基與等體積細(xì)胞培養(yǎng)基混合，獲得1×EdU溶液。

【注】：①不建議替換全部培養(yǎng)基，這樣可能會(huì)影響細(xì)胞增殖的速度。②配置好的培養(yǎng)基建議現(xiàn)用現(xiàn)配，用量以沒過細(xì)胞為宜。

3.孵育細(xì)胞2 h，棄培養(yǎng)基。

【注】：①培養(yǎng)時(shí)間取決于細(xì)胞的增殖速度和生長狀態(tài)。②大多數(shù)腫瘤細(xì)胞以及粘附細(xì)胞系均可采用2 h的孵育時(shí)間。

4.以1xPBS清洗細(xì)胞兩次，每次5 min, 以除去未摻入DNA的EdU殘留。

【注】：對(duì)于貼壁不牢的細(xì)胞可降低清洗強(qiáng)度。

實(shí)驗(yàn)步驟：

1. 將細(xì)胞以 104-105 個(gè)細(xì)胞/孔的密度接種在 96 孔板 中，加入 100μL 培養(yǎng)基，含或不含待測化合物。在 CO2 培養(yǎng)箱中在 37℃ 下培養(yǎng)細(xì)胞 24 小時(shí)。

2. 向板中加入 10μL 不同濃度的待測物質(zhì)。

3. 在培養(yǎng)箱中將培養(yǎng)板培養(yǎng)適當(dāng)時(shí)間（如 6、12、24 或 48 小時(shí)）。

4. 向板的每個(gè)孔中加入 10μL CCK-8 溶液。小心不要將氣泡引入孔中。

5. 將平板在培養(yǎng)箱中孵育 1-4 小時(shí)。

6. 在讀板之前，在定軌振蕩器上輕輕混勻。

7. 使用酶標(biāo)儀測量 450nm 處的吸光度。

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