PCR檢測試劑盒利用離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜提取豬偽狂犬病毒DNA，以此為模板，在特異引物和TaqDNA聚合酶的作用下，經(jīng)高溫變性，低溫退火、中溫延伸的循環(huán)，使特異的DNA片段拷貝數(shù)放大一倍。經(jīng)過30次循環(huán)，使擴(kuò)增的DNA片段放大數(shù)百萬倍。將擴(kuò)增的DNA片段進(jìn)行電泳，經(jīng)染色后在紫外燈照射下，肉眼可見DNA片段的擴(kuò)增帶，進(jìn)而判斷待檢樣本中是否含有豬偽狂犬病毒。
PCR檢測試劑盒具有下列特點(diǎn)：
1.根據(jù) DHBV 的保守序列設(shè)計(jì)的專一性引物，與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng)。
2.靈敏度比常規(guī)PCR 高 2-3 個數(shù)量級，可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。
3.即開即用，用戶只需要提供樣品模板，操作簡單，定量準(zhǔn)確快速。
4.一管式熒光定量 PCR 檢測，避免后續(xù)污染。
5.足夠 50 次 20μL 反應(yīng)體系的熒光定量 PCR。
PCR檢測試劑盒的注意事項(xiàng)：
1.反應(yīng)體系應(yīng)在特定配液區(qū)或者超凈工作臺中配制，整個實(shí)驗(yàn)過程嚴(yán)格控制污染。
2.PCR整個試驗(yàn)分配液區(qū)、模板提取區(qū)、擴(kuò)增區(qū)。流程順序?yàn)榕湟簠^(qū)→模板提取區(qū)→擴(kuò)增區(qū)。嚴(yán)禁器材和試劑倒流。
3.使用不含熒光物質(zhì)的一次性手套，一次性離心管。
4.反復(fù)凍融試劑將減低檢測靈敏度，本試劑盒應(yīng)在5次內(nèi)用完.
5．-20℃保存的各試劑管使用前應(yīng)在室溫下*融化，液體融化后需*混勻，2000 rpm離心15 s ，使用后立即放回-20 ℃。
6．在RNA提取過程中，避免RNA酶污染，盡量縮短操作時間。
7．注意防止試劑盒組分受污染。不要使用超過有效期限的試劑，試劑盒之間的成分不要混用。
8.PCR反應(yīng)管避免氣泡存在，管蓋需蓋緊。
9.不同批次的試劑盒勿混用。
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